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细胞有丝分裂的实验操作步骤
点击次数:2004 发布日期:2018-11-15  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
 细胞有丝割裂指数(mitotic index,MI)是指归于割裂期的细胞占总细胞数的百分率.用于表明细胞增殖旺盛的程度,也可用于检查药物对细胞增殖能力的影响。用盖玻片培育法培育细胞,做固定和染色后,镜下调查和计数1000个细胞中处于割裂期的细胞数并核算MI。
 
(一)材料
 
1.待检资料(药物)。
 
2.细胞培育成层的贴壁细胞。
 
3.试剂 甲醇、3%吉姆萨染液。
 
4.器材CO2培育箱、倒置显微镜、盖玻片(2.2 cm×2.2 cm,需预先清洁和灭菌处理)、塑料培育皿(3.5 cm)、载玻片、封片用盖玻片、中性树胶。
 
(二)试验办法
 
1.将细胞消化成单个细胞悬液,将细胞悬液分瓶培育,分红不加药的对照组和加人不一样剂量药物的试验组。
 
2.细胞传代培育的办法培育细胞,并制成浓?#20219;?05/ml的细胞悬液。
 
3.将清洁和灭菌处理的盖玻片放置在塑料培育皿中,将细胞悬液摇匀后接种于培育皿中,各皿中接种量一样。
 
4.别离于培育24 h、48ht和72h后从培育皿中取出盖玻片,在Hanks液中漂洗2~3次。
 
5.先用甲醇固定30 min,再用吉姆萨染液染色。晒干后用中性树胶封片。
 
6.油镜下或高倍镜?#24405;?#25968;1000个细胞中处于割裂期的细胞数。
 
7.核算MI按下列公式核算MI。
 
(三)成果与分析
 
    将对照组和药物组的试验成果绘制成直方图并加以比较,也可绘制成MI曲线进行比较:
 
(四)注意事项
 
1.为了削减误差,试验者有必要了解各期割裂象细胞的形状特征,该试验从头到尾最好由一人完结,当两人以上调查时,应把握一样的标准。
 
2.MI曲线与细胞生长曲线趋?#32856;?#26412;相似,但不彻底一样。如果在细胞增长达饱和密壁并进入中止期后.细胞数量许多,而割裂象细胞可彻底消失。
 
3.细胞在盖玻片上的密度常不均匀,细胞密集区与稀疏区的割裂象细胞数目也许不一样。计数时要挑选密度近似区,以削减试验误差。
来源:上海一研生物科技有限公司
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