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細胞有絲分裂的實驗操作步驟
點擊次數:1358 發布日期:2018-11-15  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
 細胞有絲割裂指數(mitotic index,MI)是指歸于割裂期的細胞占總細胞數的百分率.用于表明細胞增殖旺盛的程度,也可用于檢查藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培育法培育細胞,做固定和染色后,鏡下調查和計數1000個細胞中處于割裂期的細胞數并核算MI。
 
(一)材料
 
1.待檢資料(藥物)。
 
2.細胞培育成層的貼壁細胞。
 
3.試劑 甲醇、3%吉姆薩染液。
 
4.器材CO2培育箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2.2 cm×2.2 cm,需預先清潔和滅菌處理)、塑料培育皿(3.5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。
 
(二)試驗辦法
 
1.將細胞消化成單個細胞懸液,將細胞懸液分瓶培育,分紅不加藥的對照組和加人不一樣劑量藥物的試驗組。
 
2.細胞傳代培育的辦法培育細胞,并制成濃度為105/ml的細胞懸液。
 
3.將清潔和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培育皿中,將細胞懸液搖勻后接種于培育皿中,各皿中接種量一樣。
 
4.別離于培育24 h、48ht和72h后從培育皿中取出蓋玻片,在Hanks液中漂洗2~3次。
 
5.先用甲醇固定30 min,再用吉姆薩染液染色。曬干后用中性樹膠封片。
 
6.油鏡下或高倍鏡下計數1000個細胞中處于割裂期的細胞數。
 
7.核算MI按下列公式核算MI。
 
(三)成果與分析
 
    將對照組和藥物組的試驗成果繪制成直方圖并加以比較,也可繪制成MI曲線進行比較:
 
(四)注意事項
 
1.為了削減誤差,試驗者有必要了解各期割裂象細胞的形狀特征,該試驗從頭到尾最好由一人完結,當兩人以上調查時,應把握一樣的標準。
 
2.MI曲線與細胞生長曲線趨勢根本相似,但不徹底一樣。如果在細胞增長達飽和密壁并進入中止期后.細胞數量許多,而割裂象細胞可徹底消失。
 
3.細胞在蓋玻片上的密度常不均勻,細胞密集區與稀疏區的割裂象細胞數目也許不一樣。計數時要挑選密度近似區,以削減試驗誤差。
來源:上海一研生物科技有限公司
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